생화학실험 RNA polymerase 분리 정제

생화학실험 RNA polymerase 분리 정제

[생화학실험] RNA polymerase 분리 정제.hwp

본문 <Method> 1. Cell lysis ① pellet을 녹인 후 Buffer LB 26ml 분주하여 섞는다. ② 잘 섞은 pellet을 ice에 박혀있는 비커에 붓고 stirring하여 6ml lysozyme에 분주한 다음, 66ml PMSF와 33ul leupeptin도 첨가한다. (20min 반응시간 준다.) ③ 20min 후, 3ml 0.8% Sodium deoxycloate 첨가하고 20min 반응 시간 준다. ④ 20min 후, 50ul PMSF 첨가하고 5.6ml 2M Ammonium Sulfate 첨가한다. ⑤ Total volume 56ml 까지 Buffer LB를 첨가한다. ⑥ 5.6ml 10% PEI를 아주 천천히 넣어주고 20 min 반응시간 준다. ⑦ 39.00g 4도에서 15min ultra centrifuge한다. ⑧ supernatant만 비커에 담고 전체 volume의 0.82배(46ml) ammonium sulfate를 천천히 첨가시켜 15min 반응시킨다. ⑨ 12.00g 4도에서 15min ultra centrifuge한다. 참고문헌 김승호 외 1명 / 단백질 실험 노트 (상)/ 월드 사이언스/ 1998/ p30～31 Frank B. Armstrong / 생화학 / 청문각 / 1992 / p.72 한국생물공학회 / 생물공학실험서 / 자유아카데미 / 2000 / p.28 조덕재 / 식품분석(이론과 실습) / 지구문화사 / 1990 / p 96~10 키워드 분리, 생화학실험, 실험