생화학실험 단백질 정량 분석 - BCA법, SDS-PAGE 분석, Western Blot

생화학실험 단백질 정량 분석 - BCA법, SDS-PAGE 분석, Western Blot

[생화학실험] 단백질 정량 분석 - BCA법, SDS-PAGE 분석, Western Blot.hwp

본문 1. 제목 : 단백질 정량 분석 BCA법 & SDS-PAGE 분석 & Western Blot 2. 실험 목적 : BCA Method를 이용하여 우유 중의 단백질 함량을 분석하고 SDS-PAGE와 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질의 전기영동 결과를 관찰한 것을 바탕으로 Western Blot을 시행하여 membrane에 transfer시켜, 항원-항체 반응을 이용하여 특정한 단백질의 정량 분석과 검출하는 방법을 실험을 통해 숙지한다. 3. 이론 Ⅰ. 단백질 정량법 1) BCA(Bicinchoninic Acid) 법 - 단백질이 구리 이온(Cu2+, Cu1+)을 환원 (Reduction) 시킬 수 있는 성질을 이용 Fig 1. BCA 원리 모식도 - 단백질에 의해 환원된 구리 이온은 BCA용액과 반응을 해서 보라 빛의 화합물을 생성 - 이 화합물은 빛의 특정 영역(562nm)에서 구리 이온이 담긴 용액과 BCA용액 각각보다 빛의 흡수율이 높기에, spectrophotometer를 사용해서 측정하면 흡수율 차이를 측정할 수 있다. - 단백질의 양이 많으면 보다 많은 보라빛 화합물이 생성 → 그 화합물은 빛을 더 많이 흡수. 즉 흡수율이 증가 → 그것에 비례해서 Sample에 있는 단백질 양을 결정 참고문헌 http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=610442&cid=42420&categoryId=42420 http://biotechnology.tistory.com/21 http://blog.naver.com/redplatypus/40001508802 http://blog.naver.com/shung78/130031545514 http://www.elpisbio.com/sub/support/protocols/SDS-PAGE-gel.htm http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=431735&cid=42411&categoryId=42411 http://en.wikipedia.org/wiki/Glycine http://100.naver.com/100.nhn?docid=828536 (monoclonal/polyclonal antibody) http://en.wikipedia.org/wiki/Nitrocellulose http://en.wikipedia.org/wiki/Polysorbate_20 http://en.wikipedia.org/wiki/Horseradish_peroxidase 정지은, Tech Note-Western blot, 서린바이오사이언스, 2012, pp. 1-11 이승택, 2013-1 단백질 정량 강의자료, 연세대학교 생화학과, 2013, pp.1-16. 하고 싶은 말 열심히 작성하고 좋은 평가를 받은 자료입니다. 키워드 분석, 생화학실험, BCA법, 단백질, 실험, 법